EXTRAÑA PRUEBA DE ELISA

El investigador médico Dr. Roberto A. Giraldo está obteniendo sorprendentes resultados.
 

Roberto Giraldo.

Roberto Giraldo es médico y trabaja en el Laboratorio de Biología Molecular e Inmunología  del Medical Cornell Hospital de New York. Tras más de 25 años dedicado al estudio de las inmunodeficiencias, es uno de los científicos que han desmentido la existencia del VIH y señala los factores ambientales y del tipo de vida como los factores responsables del stress celular que causan el S.I.D.A. Actualmente trabaja también junto con la Administración norteamericana en el diseño de experimentos que han de resolver la polémica sobre la existencia del supuesto VIH.

     Roberto Giraldo

Página web: http://www.robertogiraldo.com/

Durante los últimos 6 años he estado trabajando en un laboratorio de Inmunología clínica en un Hospital de una de las más prestigiosas Universidades de la Ciudad de Nueva York. Aquí he tenido la oportunidad de llevar a cabo personalmente y conocer en detalle los actuales tests utilizados para diagnosticar la presencia del VIH: ELISA, Western Blott y Tests de la Carga Viral.

1. Dilución del suero para el test ELISA.

El test ELISA testa los anticuerpos contra lo que se supone es el Virus de la Inmunodeficiencia Adquirida Humana. Para realizar este tests, el suero sanguíneo de un individuo se disuelve en la proporción de 1:400, con un determinado diluyente. De acuerdo con el fabricante del kit del test, este diluyente contiene:

0,1% triton x-100, Suero de Bovino y Cabra (concentración mínima del 5%) y lisado de Linfocitos-T humanos (proporción mínima 1:7500). Conservantes: 0,1% de Ácido sódico1.

Esta dilución, extraordinariamente alta con respecto al suero (400 veces), me cogió por sorpresa. La mayoría de tests serológicos que buscan la presencia de anticuerpos contra gérmenes emplean suero sanguíneo neto (sin diluir). Por ejemplo los tests que buscan los anticuerpos de los virus de la hepatitis A y B, los de la rubéola, sífilis, histoplasma y cryptococos, por mencionar sólo unos pocos, utilizan el suero sanguíneo directamente (sin diluir). Sin embargo, para intentar evitar reacciones positivas falsas, algunos tests serológicos usan suero sanguíneo diluido; por ejemplo este es el caso de los tests que averiguan los anticuerpos de los virus del sarampión, varicela y paperas, los cuales utilizan una dilución de 1:16, para los citomegalovirus (CMV) 1:20 y para los Virus de Epstein Barr (EBV) 1:10.

La pregunta obvia es: ¿qué hace al VIH tan especial que para analizar el suero sanguíneo, necesite ser diluido 400 veces?. ¿Y qué pasaría si no diluyera este suero sanguíneo?.

2. Ensayando el test ELISA sin diluir el suero.

Para responder a estas preguntas realicé un experimento en un laboratorio médico en Yorktown Heights, Nueva York. Lo llevé a cabo utilizando el mismo kit del test más utilizado en los laboratorios clínicos de todo el mundo1.

Primero tomé muestras de sangre que, a una proporción de 1:400, el resultado fue negativo con respecto a los anticuerpos del VIH. Después tomé las mismas muestras de suero sanguíneo y las analicé de nuevo, esta vez sin diluirlas, y el resultado dio en todas positivo.

Desde entonces he llevado a cabo 100 experimentos y obtuve siempre el mismo resultado. Incluso analicé mi propia sangre, la cual a 1:400 daba un resultado negativo. A 1:1 (no diluida) el resultado fue positivo. Debo mencionar que, a excepción de mi sangre, todas las muestras de los pacientes provenían de peticiones médicas solicitando el test del VIH. Por lo tanto es probable que la mayor parte de las muestras de sangre que analicé pertenecieran a individuos con alto riesgo de SIDA.

Según los laboratorios Abbot, el valor de absorción (intensidad de color amarillo),

aumenta en proporción a la cantidad de anticuerpos anti VIH-1, los cuales están unidos en cadena1.

Me di cuenta de que los valores de absorción de las muestras daban negativo cuando se habían diluido (1:400) pero positivo cuando no estaban diluidas (1:1), tenían valores más bajos que las muestras que, diluidas, reaccionaban positivo en los dos tests: ELISA y Western Blott. Esto probablemente significa que la sangre que da un resultado negativo cuando se la diluye pero positivo cuando no esta diluida, tiene un nivel más bajo de anticuerpos que la sangre diluida que da doble positivo y, por lo tanto, seguramente dará negativo en el Western Blott. Sin embargo, no he tenido la oportunidad de comprobar esta hipótesis.

El gráfico siguiente ilustra como la sangre que reacciona negativamente para el VIH en una proporción de 1:400 siempre reacciona positivo a 1:1:
 

Realización del test ELISA para el VIH con dos diferentes concentraciones del suero sanguíneo de una persona.  
(a) Resultados a 1:400 (b) Resultados a 1:1
9112324b G5 0.076 --- 9112324b G5 0.262 reactivo
9112325b H1 0.081 --- 9112325b H1 0.259 reactivo
9112326b H2 0.071 --- 9112326b H2 0.329 reactivo
9112327b H3 0.060 --- 9112327b H3 0.401 reactivo
9112328b H4 0.073 --- 9112328b H4 0.345 reactivo
9112329b H5 0.062 --- 9112329b H5 0.343 reactivo
9112330b J1 0.060 --- 9112330b J1 0.234 reactivo
9112331b J2 0.077 --- 9112331b J2 0.306 reactivo
9112332b J3 0.067 --- 9112332b J3 0.248 reactivo
9112333b J4 0.086 --- 9112333b J4 0.222 reactivo

La columna (a) indica los 10 resultados de las muestras que reaccionan negativo a una dilución de 1:400.
La columna (b) indica los resultados de las mismas muestras reaccionando positivo a la dilución de 1:1.

Es importante tener en cuenta que el test de anticuerpos del VIH Western Blott también necesita suero diluido. A pesar de que también contiene una inhabitual alta dilución, aquí este particular suero se diluye sólo en la proporción de 1:502. No he tenido todavía la ocasión de realizar este test con muestras no diluidas (a 1:1).

3. Debate.

Seguidamente expongo las tres explicaciones posibles de porque las muestras de sangre no diluidas siempre reaccionan positivo ante el test ELISA.

3.1. Todo el mundo tiene anticuerpos del VIH.

Está mundialmente aceptado que el test ELISA del VIH detecta anticuerpos contra lo que se conoce como el Virus de la Inmunodeficiencia Adquirida3456. Y la empresa farmacéutica que comercializa los componentes del ELISA afirma que:

El Abbot HIVAB HIV-1 EIA es una Inmuno-Enzima cualitativa in vitro para la detección del Anticuerpo del Virus de la Inmunodeficiencia Humana del tipo 1 (VIH-1) en el suero sanguíneo y el plasma1.

Dado que todas las muestras de sangre no diluidas reaccionan positivamente en el test ELISA, un test que supuestamente analiza los anticuerpos del VIH, los resultados que presenta apuntan a que todos y cada uno de los humanos tienen anticuerpos del VIH, y por consiguiente sugiere que todo el mundo ha sido expuesto a los antigenos del VIH.

Esto significaría que todos nosotros hemos estado expuestos al virus considerado como la causa del SIDA. Las personas que reaccionan posititvamente incluso a la dilución de 1:400 deben ser los que han sufrido el nivel más alto de exposición a los antígenos del VIH. El resto de la gente -los que sólo reaccionan positivo con suero sanguíneo no diluido (a 1:1)- son los que seguramente se han enfrentado a una menor exposición al VIH.

3.2. Todo el mundo posee diferentes niveles de infección del VIH.

También está aceptado internacionalmente que una persona que reacciona positivamente ante los anticuerpos del VIH no ha estado sólo expuesta, sino que está infectada por un virus mortal que causa inmunodeficiencia3456. En consecuencia, las reacciones positivas de todos los sueros no diluidos significan que todos, o por lo menos todas las muestras de sangre que he analizado, incluyendo la mía, estamos infectados por este virus «mortal». Los que reaccionan positivo a la proporción 1:400 sencillamente sufrirían un mayor grado de infección «mortal» que aquellos que sólo reaccionan positivo mediante suero no diluido.

3.3. El test no es específico para el VIH.

Con los resultados que he presentado aquí se podría afirmar que el test utilizado para detectar anticuerpos anti VIH no es el específico para el VIH, como ha quedado expuesto anteriormente7891011121314. Por lo tanto, deben haber más razones a parte de la infección por VIH, anteriores o actuales, que expliquen porqué una persona reacciona positivo. El test también da resultado positivo ante la ausencia del VIH7891011121314.

La literatura científica ha publicado más de 70 diferentes razones que pueden provocar una reacción positiva, a parte de la actual infección por VIH7,10,11,14,15. Todos estos condicionantes tienen como denominador común la estimulación de poliantígenos15,16.

Abbott.Incluso los Laboratorios Abbott conocen perfectamente los problemas característicos del test ELISA, y afirman lo siguiente:

El EIA analizado sólo no puede utilizarse para diagnosticar el SIDA, ni siquiera a pesar de que las investigaciones sobre las muestras reactivas sugieran una alta probabilidad de que el anticuerpo anti VIH-1 esté presente.

y

Si bien para todas las aplicaciones, tanto clínicas como a la salud pública del EIA, el grado de riesgo de contraer la infección por VIH en una persona estudiada y el grado de reactividad del suero, pueden ser de utilidad para interpretar el test, estas correlaciones son deficitarias. Por lo tanto, en la mayoría de resultados que se consideran como seguros, sería apropiado investigar repetidamente las muestras reactivas con tests adicionales más específicos o realizar tests suplementarios1.

Curiosamente, existen países como Gran Bretaña donde el diagnóstico del VIH se basa sólo en el test ELISA. No necesitan ni el Western Blott ni ningún otro test.

La única manera válida para establecer la sensibilidad y especificidad de un determinado test es empleando el «gold standard». Sin embargo, puesto que el VIH nunca ha sido aislado como una genuina entidad viral171819, no puede existir un «gold standard» para el VIH. La sensibilidad y especificidad de los tests de anticuerpos del VIH se han determinado, en cambio, basándose en la suposición de que el VIH es la causa del SIDA, de este modo:

Los estudios Abbot demuestran que: La sensibilidad establecida en base al supuesto predominio del 100% de anticuerpos del VIH-1 en pacientes de SIDA, se estima en un 100% (sobre 144 pacientes testados).

y

La sensibilidad establecida en base al supuesto predominio cero del VIH-1 en donantes elegidos al azar, se estima en un 99,9/o (sobre 4.777 donantes testados, elegidos al azar1).

Actualmente no existe un standard reconocido para establecer la presencia o ausencia del anticuerpo VIH-1 en la sangre humana. Por lo tanto la sensibilidad se ha determinado a partir de diagnósticos clínicos de SIDA y la especificidad se ha establecido en base a donantes aleatorios1.

[El énfasis de las frases subrayadas es mío].

Partiendo de que no hay evidencia científica de que el test ELISA sea específico para los anticuerpos del VIH, un test ELISA que reaccione a cualquier concentración de suero significaría la presencia de anticuerpos no específicos o poliespecíficos20. Estos anticuerpos pueden estar presentes en todas las muestras de sangre. Son muy probablemente el resultado de la respuesta al estrés, no teniendo relación con ningún retrovirus, sin mencionar al VIH21,22. En este caso, un test reactivo podría ser válido para medir el grado de exposición a factores estresantes o a agentes oxidantes15,16.

La conclusión ineludible es que todas las reacciones positivas ante los anticuerpos del VIH son, sencillamente, falsos positivos. Si nadie es «positivo» en cuanto al VIH, las personas que reaccionan «positivo» ante el test ELISA lo hacen ante algo más que el VIH.

4. Propuesta para averiguar el verdadero significado de los tests «anticuerpo del VIH».

Para revelar el significado de estos tests, propongo un sencillo experimento: recoger sangre de tres grupos de personas y llevar a cabo el test de tres formas diferentes: con una alta dilución, no diluido y diluido utilizando una amplia gama de distintas concentraciones. El primer grupo estaría formado por personas sanas de muy diferentes edades; el segundo grupo lo constituirían personas pertenecientes al convencional «grupo de riesgo» del SIDA; el tercer grupo lo formarían personas con características clínicas relacionadas y no relacionadas con el SIDA. A todos los grupos se les realizaría los dos tests: ELISA y Western Blott.

Además, todas las muestras de sangre estarían sometidas al «test de la carga viral del VIH».

Los resultados de tales experimentos determinarían cual de estas medidas de test produce cada relación en un nivel individual de exposición a agentes estresantes o oxidantes. O si bien, los tests podrían ser rescatados como medida de un nivel individual de intoxicación.

Esperamos encontrar la ayuda económica necesaria para llevar a cabo este experimento. Mientras tanto, y puesto que hay personas que están reaccionando positivo ante estos tests que no son específicos para el VIH, por favor, dejemos de etiquetarlos como «VIH positivos».

5. Agradecimientos.

Health Education AIDS Liaison (HEAL).Quiero agradecer a Albert Padovani, Director del Laboratorio Médico de Yorktown, el haberme permitido llevar a cabo en su laboratorio los experimentos descritos aquí, y por proporcionarme los reactivos para los tests. También agradezco a Tom Di Ferdinando, Director Ejecutivo de HEAL en Nueva York por haber editado el manuscrito de este escrito y por sus valiosas sugerencias.
 



Dr. Roberto A. Giraldo. Médico especialista en medicina interna, infecciosa y enfermedades tropicales. Miembro de la Junta de Directores del Grupo Científico para la Reevaluación de la Hipótesis VIH-SIDA y del Comité para la Educación sobre salud y SIDA (HEAL). Investigador independiente del SIDA. Autor del libro SIDA y Estresantes, New York City. E-mail:
RobGiraldo@aol.com Página web: http://www.robertogiraldo.com/
 



Referencias.

1Laboratorios Abbot. Virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo 1. FUVAB FffVI EIA. Laboratorios Abbott, 66-8805/R5, enero 1997:5.
2Epitope Organon Teknika. Virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo 1 (fuV-1). I-UV-1 «kit» de Western Blott. PN201-3039 revisión número 6.
3Feinberg MA & Volberding PA. Ensayos sobre el virus de la Inmunodeficiencia Humana. En: Cohen PT, Sande MA y Volberding PA. Conocimientos básicos sobre el SIDA. Boston: Little, Brown and Company, 1994: sección 2.
4Pins MR. Teruya y Stowell CP. Ensayos sobre el Virus de la Inmunodeficiencia Humana y Definición del proceso: Resultados Pragmáticos y Técnicos. En: Cotton D y Watts DH. Aplicación Médica del SIDA en Mujeres. New York. John Wiley & Sons, 1997: 163-176.
5Metcalf JA, Davey RT y Lane HC. Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida: Tests serológicos y virológicos. En Devita VT, Curran J, Hellman S, et al. SIDA: Etiología, Diagnóstico, Tratamiento y Prevención. Cuarta Edición. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1997: 177-196.
6Weiss SH. Laboratorio de detección de Infecciones Humanas Retrovirales. En: WORMSER GP. SIDA y Otras Manifestaciones VUF. New York: Lippincott-Raven, 1998:175-200.
7Papadopulos-Eleopulos, E., Turner V. & Papadimitrou JM. ¿Un resultado Western Blott positivo, es una prueba de infección por VIH?. Bio/Technology 1993; 11:696-707.
8Papadopulos-Eleopulos, E., Turner, V., Papadimitrou JM. & Causer D. Anticuerpos del VIH: Nuevas cuestiones y petición de su clarificación. Curr Med Res Opin 1997; 13:627-634.
9Hodgkinson N. La ciencia se equivoca con el «Test del SIDA» en el SIDA: El fracaso de la Ciencia Contemporánea. Un virus que nunca ha engañado al mundo. Londres: Fourth Estate, 1996:232-262.
10Johnson C. Factores conocidos que dan falsos-positivos en los resultados del test de anticuerpos del SIDA; Zenger’s, San Diego, California, septiembre 1996a:8-9.
11Johnson C. ¿De todas formas, a quién pertenecen los anticuerpos?. Continuum (Londres). Septiembre/octubre 1996b; 4(3):4-5.
12Turner VF. ¿El test de anticuerpos del VIH confirma la infección por VIH?. Entrevista realizada por Huw Christie, editor de Continuum. Continuum (Londres) Invierno ; 5(2):10-19.
13Shenton J. Falso-Positivo: Test erróneo y supervivencia a largo plazo. En: Falso Positivo: Descubriendo los Mitos que rodean al VIH y al SIDA. Londres: I.B. Tauris, 1998: 238-239.
14Giraldo RA. Ordeñando al Mercado. ¿Difundirán las Madres la fórmula W.H.O.?. Continuum (Londres) 1998; 5(4):8-10.
15Papadopulos-Eleopulos E. Reevaluación del SIDA – ¿Es la oxidación producida por los factores de riesgo, la primera causa?. Medical Hyphotesis 1988; 25:151-162.
16Giraldo RA. SIDA y factores estresantes U: Un Proyecto sobre la patogénesis del SIDA. En: SIDA y factores estresantes. Medellín, Colombia: Impresos Begón, 1997: 57-96.
17Papadopulos-Eleopulos, E., Turner, V., Papadimitrou JM. & Causer D. Aislar el VIH. ¿Realmente se ha conseguido?. El caso en contra. Continuum (Londres) 1996; 4(3):S1-S24.
18
Lanka, Stefan. No se ha realizado una identificación viral. No se dispone de una clonación como prueba de aislamiento. Continuum (Londres) 1997; 4(5):31-33.
19De Harven E. Observaciones sobre los métodos del aislamiento retroviral. Continuum (Londres) 1998; 5(3):20-21.
20Wing MG. Fundamentos moleculares para el anticuerpo poliespecífico. Clin Exp Immunol 1995; 99:313-315.
21Snyder HW y Fleissner E. Especificidad de anticuerpos humanos ante glicoproteínas oncovíricas: Anticuerpos naturales reconocen antígenos dirigidos contra estructuras de carbohidratos. Proc Nat Acad Sci USA 1980; 77:1622-1626.
22Barbacid K., Bolognesi D. & Aaronson SA. Los seres humanos poseen anticuerpos capaces de reconocer glicoproteínas oncovíricas: Se demuestra que estos anticuerpos se generan como respuesta a la modificación que sufren las células ante las glicoproteínas, en lugar de ser una consecuencia tras la exposición al virus. Proc Nat Acad Sci USA 1980; 77:.

Artículo publicado en el número 5, volumen 5, medio invierno del 1999, de la revista «Continuum».

http://www.monarcasmexico.org/elisa.htm

 

 

Responder

Introduce tus datos o haz clic en un icono para iniciar sesión:

Logo de WordPress.com

Estás comentando usando tu cuenta de WordPress.com. Cerrar sesión / Cambiar )

Imagen de Twitter

Estás comentando usando tu cuenta de Twitter. Cerrar sesión / Cambiar )

Foto de Facebook

Estás comentando usando tu cuenta de Facebook. Cerrar sesión / Cambiar )

Google+ photo

Estás comentando usando tu cuenta de Google+. Cerrar sesión / Cambiar )

Conectando a %s